Gebruikelijke reagentia in celcultuur
Wanneer dierlijke cellen of weefsels het lichaam verlaten om buiten het lichaam gekweekt te worden, is het noodzakelijk om ze te voorzien van verschillende voedingsstoffen die nodig zijn voor groei en verschillende reagentia die nodig zijn voor een betere celgroei in vitro. In dit nummer zal ik kort enkele reagenscomponenten introduceren die worden gebruikt in het celkweekproces en hun functies.
1. Samenstelling celkweekmedium
(1). Basiskweekmedium
Gebruikelijke basale media omvatten voornamelijk MEM, DMEM en RPMI, die voornamelijk buffersystemen bieden, waaronder glucose, aminozuren, water, sporenelementen en natriumbicarbonaat.
● Glutamine
Het is een essentieel aminozuur dat nodig is voor celgroei en neemt deel aan eiwitsynthese en nucleïnezuurmetabolisme.
● Fenol rood indicator
Een veelgebruikte zuur-base-indicator, het toont geel als het zuur is, rood als het neutraal is en paars als het alkalisch is. Fenolrood wordt gebruikt als indicator voor de pH-waarde in het medium.
● Carbonaat/PH buffersysteem
Een fysiologisch pH-buffersysteem. Door de zuurproductie tijdens het celmetabolisme zal de HCO3- in het medium geleidelijk worden verbruikt, dus CO2 moet tijdig worden aangevuld om de pH binnen een bepaald bereik te houden.
(2). Dierlijk serum
Voeg 2%-20% serum toe aan het basale medium om een compleet medium te vormen. Serum kan de cellen niet alleen voorzien van de basisvoedingsstoffen die nodig zijn voor groei, maar bevat ook belangrijke componenten die betrokken zijn bij het celmetabolisme, zoals groeifactoren, hormonen, sporenelementen en ionen.
(3). antibiotica
Om te voorkomen dat de cellen tijdens het kweekproces worden besmet, wordt aan het volledige medium meestal een penicilline-streptomycinemengsel toegevoegd, dus een dubbel antilichaam. Penicilline is vooral effectief tegen Gram-positieve bacteriën en streptomycine is effectief tegen veel Gram-negatieve bacteriën. .
2. Trypsine-EDTA
Trypsine kan het eiwit tussen cellen hydrolyseren en vervolgens de cellen scheiden. EDTA is een chemische chelaatvormer met lage toxiciteit en heeft een afzonderlijk effect op hechtende cellen. Wanneer de twee in combinatie worden gebruikt, is de efficiëntie van het verspreiden van cellen hoger. Deze stap wordt spijsverteringscellen genoemd. Voor verschillende cellen zijn er verschillende vereisten voor de temperatuur, tijd en concentratie van trypsine bij gebruik. Als de vertering onvoldoende is, kunnen de cellen niet worden verteerd en zal overmatige vertering celbeschadiging veroorzaken. Omdat serum in het medium de activiteit van trypsine kan verminderen, wordt meestal volledig medium gebruikt om de celvertering te beëindigen.
3. PBS-buffer
PBS is een fosfaatgebufferde zoutoplossing met zoutbalans en instelbare pH-bufferende werking. Het wordt over het algemeen gebruikt om cellen te wassen en de osmotische druk van de cel te handhaven.
4. Dimethylsulfoxide (DMSO)
Een belangrijk doordringend celbeschermingsmiddel en een belangrijk bestanddeel in celcryopreservatievloeistof. Tijdens het cryopreservatieproces van cellen kan DMSO snel het celmembraan binnendringen en de cel binnendringen, het vriespunt verlagen, het bevriezingsproces vertragen, de ionenconcentratie in de cel verhogen, de vorming van ijskristallen in de cel verminderen en de cel verminderen schade.
5. Mycoplasma-remmers
Mycoplasmabesmetting is een veel voorkomende bron van besmetting in het celkweekproces. Mycoplasma-remmers kunnen echter worden gebruikt om mycoplasma in de celvloeistof in het beginstadium van besmetting te elimineren, zodat het experiment kan worden voortgezet.
6. Trypaanblauwe kleurstof
Een biologisch kleuringsreagens dat gewoonlijk wordt gebruikt om de integriteit van celmembranen te detecteren. Vanwege het verlies van de integriteit van het celmembraan en de verhoogde permeabiliteit, kunnen dode cellen blauw worden gekleurd door trypaanblauw, terwijl levende cellen niet worden gekleurd omdat ze intacte celmembranen hebben die kunnen voorkomen dat trypaanblauw de cel binnendringt. Levende en dode cellen kunnen worden onderscheiden door celkleur onder een microscoop, wat handig is voor het tellen van levende cellen.
