I. Wat is een celkweekfles?
Een celkweekfles is een veelgebruikt laboratoriuminstrument voor celkweek. Deze is gemaakt van hoogwaardig polystyreen (PS) en wordt vervaardigd met behulp van uiterst precieze mallen en volledig geautomatiseerde productieprocessen. Het product wordt gebruikt voor celkweek in het laboratorium; de uitstekende optische eigenschappen vergemakkelijken microscopische observatie en het oppervlak is TC-behandeld voor een betere celhechting.
II. Het enten van de celsuspensie in de kweekfles
1. Het mengen van de celsuspensie: Bereid de celsuspensie voor volgens de gewenste experimentele concentratie en meng deze grondig in een kweekfles, kweekvat of andere container.
2. Injecteer de celsuspensie langzaam en gelijkmatig met een pipet of Pasteurpipet in de celkweekfles, waarbij spatten of schuimvorming worden vermeden. (Bij meerlaagse celkweekflessen moet speciale aandacht worden besteed aan de gelijkmatige verdeling van de vloeistof; het kantelen of draaien van de fles kan helpen om een gelijkmatige vloeistofstroom in elke laag te garanderen.)
3. Plaats de kweekfles voorzichtig op een stabiel werkoppervlak, met de gladde, vlakke kant naar boven en de gegradueerde kant naar beneden (stapelbaar ontwerp voor eenvoudig gebruik).
4. Plaats de celkweekfles in een geschikte incubator en stel de juiste temperatuur (bijv. 37 °C), luchtvochtigheid en gasconcentratie (bijv. 5% CO₂) in.
5. Laat de cellen gedurende een bepaalde tijd in de kweekfles groeien.
III. Het kweekmedium vervangen
1. Het oude kweekmedium verwijderen: Kantel de fles bij het afzuigen van het kweekmedium in een hoek van 45 graden met de gladde kant naar u toe. Zuig het oude kweekmedium voorzichtig af met een Pasteurpipet of pipet, let erop dat u de aangehechte cellen niet losmaakt. Als er veel zwevende cellen of onzuiverheden in het kweekmedium aanwezig zijn, spoel de cellen dan een of twee keer met PBS-buffer om deze onzuiverheden te verwijderen.
2. Nieuw kweekmedium toevoegen: Nadat het oude kweekmedium is verwijderd, voegt u een geschikte hoeveelheid kweekmedium toe aan de kweekfles. Voeg het medium toe via de zijwand van de kweekfles om te voorkomen dat de aangehechte cellen direct worden geraakt. De hoeveelheid toegevoegd vers kweekmedium moet worden bepaald op basis van de celdichtheid en de groeisnelheid om een normale celgroei te garanderen.
IV. Celverzameling
1. Verwijderen van oud kweekmedium: Zuig het oude kweekmedium voorzichtig uit de celkweekfles, voeg een geschikte hoeveelheid PBS-buffer toe en schud voorzichtig om eventueel resterend kweekmedium te verwijderen, zodat het celoppervlak schoon is.
2. Vertering en beëindiging van de celcyclus: Voeg een geschikte hoeveelheid trypsine (≥3 ml) toe voor de vertering gedurende 2-3 minuten en beëindig de vertering vervolgens met serumhoudend kweekmedium.
3. Celverzameling: Breng de celsuspensie met een pipet over in een centrifugebuis (voorkom schuimvorming) en centrifugeer gedurende 5 minuten op een geschikte snelheid (bijv. 800 tpm) zodat de cellen naar de bodem van de centrifugebuis zakken.
4. Verzameling van het celprecipitaat: Verwijder na het centrifugeren voorzichtig de supernatant uit de centrifugebuis (gooi het celprecipitaat niet weg). Verzamel het celprecipitaat uit de centrifugebuis en ga verder met de verwerking zoals vereist voor het experiment.