1. De detectiestroom van het instrument:
Het eerste dat u moet overwegen, is hoe vaak het laboratorium een kwantitatief PCR-instrument moet gebruiken. David Ginzinger, hoofd van apparatuur voor genoomanalyse aan de Universiteit van Californië, San Francisco Cancer Center, heeft de meeste kwantitatieve PCR-machines op de markt getest. Hij zei dat als het bijvoorbeeld niet op grote schaal wordt gebruikt, het vooral wordt gebruikt om bekende genen te testen, er geen dure high-end producten voor nodig zijn. Maar voor die laboratoria die nieuwe medicijndoelen en ziektemarkers moeten vinden, hebben ze instrumenten nodig die platen met 384 putjes kunnen bevatten en sneller kunnen werken. Alleen zo'n high-throughput-instrument is echter niet snel genoeg en u zult merken dat monstervoorbereiding een knelpunt wordt voor snelheidsbeperking. Daarom hebben laboratoria met een hoge doorvoer vaak meer geautomatiseerde instrumenten nodig. Zolang de knop wordt ingedrukt, zal het instrument automatisch monsters verwerken, nucleïnezuren zuiveren en PCR-sjablonen voorbereiden.
2. Het vermogen van meervoudige versterking
Meervoudige versterking wordt heter. Realtime kwantitatieve PCR-apparatuur is niet immuun. Het hoogwaardige kwantitatieve PCR-instrument heeft meerdere detectiekanalen, zodat het instrument het versterkingsproces van meerdere sjablonen in dezelfde monstertank kan detecteren. De nieuwe LightCycler2.0 heeft 6 detectiekanalen, 3 meer dan het origineel. SmartCyclerⅡ heeft 4 detectiekanalen. Stratagene, dat bekend staat om zijn bibliotheekproducten, heeft ook een kwantitatief PCR-instrument Mx3000P met minder dan de helft van de prijs van Roche en een goede reputatie, namelijk 4 detectiekanalen. Meervoudige amplificatie is echter niet voor iedereen geschikt omdat het het experiment bemoeilijkt.
3. Software:
Wanneer u klaar bent om een kwantitatief PCR-instrument te kiezen, moet u de bijgevoegde software controleren. Is het handig in gebruik, kun je de analyse uitvoeren die je nodig hebt, er zijn verschillende uitvoerformaten. U moet er echter op letten of de te gebruiksvriendelijke software relatief eenvoudig in functie is en geen complexe berekeningen kan uitvoeren. De vorige software vereist dat u verdere analyses uitvoert. De nieuwe software kan alles al aan. Naast basisfuncties kan sommige software ook meer functies hebben, zoals primer- en sondeontwerp, ontwerp met meerdere analyses, achtergrondcorrectie, gegevensnormalisatie enzovoort. Willian Demyan, hoofd van de applicatie- en technische serviceafdeling van Roche's Applied Science Department, benadrukte dat kwantitatieve PCR een proces van geometrische versterking is. In het begin is er een kopieverschil en de resultaten variëren per geometrische volgorde.
4. Flexibiliteit:
Grootschalige drukke laboratoriumapparatuur is zeker benijdenswaardig, en conventionele laboratoria kunnen ook prachtige keuzes hebben. De huidige leveranciers hebben veel technische experts, niet alleen om uw huidige behoeften te begrijpen, maar ook zeer attent voor u om mogelijke toekomstige veranderingen in de vraag te overwegen, zoals het leveren van een verscheidenheid aan upgradebare accessoires en modules. BioRad's MyCycler kan modules selecteren en upgraden naar realtime kwantificering. Het kwantitatieve PCR-instrument van ABI heeft een verscheidenheid aan verschillende monstertanks, die tanks met 96 putjes kunnen veranderen in tanks met dubbele 384-putjes om te voldoen aan een aantal hoge doorvoervereisten. Voor laboratoria die net zijn begonnen met qPCR in kleine hoeveelheden, is het SmartCycler II kwantitatieve PCR-instrument een goede keuze. Een basismodule heeft 16 onafhankelijke monstertanks voor temperatuurregeling en 16 volledig onafhankelijke verschillende experimenten kunnen tegelijkertijd of ervoor en erna worden uitgevoerd. "Toegang"; wanneer het laboratorium een experiment op grotere schaal nodig heeft, kan het zeer economisch worden opgewaardeerd, van 1 naar 6 basismodules, oftewel 96 monsterputjes. Hoewel platen met 96 putjes niet kunnen worden gebruikt, kunnen wanneer een student een klein aantal experimenten start, anderen ook op elk moment aansluiten om hun eigen onafhankelijke experimenten te starten, en ze interfereren niet met elkaar, wat de flexibiliteit vergroot. Het is een zeer flexibele optie voor laboratoria die slechts een klein aantal experimenten hebben en in het begin een krap budget hebben.
5. Onzekerheid
Hoewel de software gedeeltelijk kan worden gecorrigeerd, is het beter om een instrument te kopen met minder systematische fouten zonder dat er zoveel rekencorrecties nodig zijn dan door berekening. Cinzinger vindt dat er speciale aandacht moet worden besteed aan de verschillen tussen de monsterputjes van het instrument. Naast de bekende temperatuurverschillen tussen de monstergaatjes, zijn er ook kleine verschillen in de optische padafstand tussen het monstergat en de detectiesonde, het kleine verschil in de lengte van de vezel die verantwoordelijk is voor het verzenden en ontvangen en verzenden van signalen , het kleine verschil in de afstand en hoek tussen de lens en het monstergat, en zelfs het effect van de monstercel op de signaaloverdracht. Cinzinger heeft dezelfde test gedaan op de meeste commercieel beschikbare kwantitatieve PCR-instrumenten. Hij versterkt dezelfde monsters en reagentia in realtime in elk putje van het instrument. Helaas zullen er vaak verschillende resultaten zijn tussen verschillende monsterputjes.
6. Selectie van sets
Hoewel het verkooppersoneel zal bogen op uitstekende kwaliteitscontrolekits en oplossingen een-op-een resultaten zullen opleveren, is de aankoop van kant-en-klare kits geen oplossing voor de verschillen. Serieuze evaluatie-experimenten en analytische experimenten zijn de oplossingen.
