PCR: Polymerase Chain Reaction, waarbij DNA wordt gebruikt om in vitro bij 95 °C af te wikkelen (denatureren). Bij 55 °C worden primers en enkele strengen gecombineerd (annealing) volgens het principe van complementaire basenparen, en vervolgens wordt de temperatuur aangepast tot ongeveer 72 °C, DNA-polymerase synthetiseert complementaire strengen (verlengt zich) in de richting van fosforzuur naar vijf koolstofsuikers (5'-3').
Het PCR-instrument is eigenlijk een apparaat voor temperatuurregeling, dat een goede temperatuurregeling kan uitvoeren tussen 95 ° C, 55 ° C en 72 ° C.
Volgens het doel van DNA-amplificatie- en detectienormen, kunnen PCR-instrumenten worden onderverdeeld in: gewone PCR-instrumenten, gradiënt-PCR-instrumenten, in-situ PCR, real-time fluorescerende kwantitatieve PCR-instrumenten, enz.
①Gewone PCR-machine
Over het algemeen wordt een PCR-machine die alleen een specifieke gloeitemperatuur voor een PCR-amplificatie kan uitvoeren, een gewone PCR-machine genoemd, die ook een traditionele PCR-machine is. Als u het voor verschillende gloeitemperaturen wilt gebruiken, moet u het meerdere keren uitvoeren.
Gewone PCR-machines worden voornamelijk gebruikt in wetenschappelijk onderzoek, onderwijs, klinische geneeskunde, inspectie, quarantaine, enz.
②Gradient PCR-instrument
Eenmalige PCR-amplificatie kan een reeks verschillende gloeitemperatuuromstandigheden instellen (meestal 12 temperatuurgradiënten), gradiënt-PCR-instrument genoemd. Verschillende DNA-fragmenten hebben verschillende optimale annealingtemperaturen. Door een reeks gradiënt-gloeitemperaturen voor amplificatie in te stellen, kan eenmalige PCR-amplificatie de meest geschikte annealingstemperatuur met een hoog expressieniveau voor effectieve amplificatie screenen.
Gradient PCR-instrument wordt voornamelijk gebruikt om de amplificatie van onbekende DNA-gloeitemperatuur te bestuderen, wat tijd en kosten bespaart. Het kan ook worden gebruikt als een gewone PCR zonder een verloop in te stellen. Gradient PCR-instrument wordt meestal gebruikt in wetenschappelijk onderzoek, onderwijsinstellingen, inspectie, quarantaine, enz.
③In-situ PCR-machine
PCR is om DNA uit cellen of weefsels te extraheren voor genamplificatiereactie, terwijl PCR in situ is om de integriteit van cellen of weefsels te behouden, het PCR-reactiesysteem in weefsels en cellen te laten doordringen en genen uit te voeren op de locatie van het doel-DNA van de cel . Versterking. Niet alleen kan het doelwit-DNA worden gedetecteerd, maar ook het type cel waarin het doelwit-DNA voorkomt, wat meer bevorderlijk is voor het onderzoeken van de relatie tussen het doelwit-DNA en de cel.
Het in-situ PCR-instrument wordt voornamelijk gebruikt voor: (1) Detectie van exogene genfragmenten, verhoging van de detectiegraad, gericht op de inspectie van virale infecties, zoals HIV, HPV, HBV, CMV, enz.; (2) Observatie van de verspreiding van pathogenen in het lichaam Wet (3) Endogene genfragmenten, zoals humane monogene ziekten, recombinante genen, getransloceerde chromosomen, Ig-mRNA-fragmenten, oncogenfragmenten, enz. (4) Detectie van geïntroduceerde genen; (5) Detectie van genetische ziekten zoals β-thalassemie.
④Real-time fluorescerend kwantitatief PCR-instrument
Het fluorescentiesignaalacquisitiesysteem en het computeranalyse- en verwerkingssysteem worden toegevoegd op basis van het gewone PCR-instrumentontwerp om een PCR-instrument te vormen met een kwantitatieve fluorescentiefunctie. Het principe van PCR-amplificatie is hetzelfde als dat van gewone PCR-amplificatie. De primers die tijdens PCR-amplificatie worden toegevoegd, worden gelabeld met isotopen, fluoresceïne, enz., en de primers en fluorescente probes worden gebruikt om tegelijkertijd specifiek aan de matrijs te binden voor amplificatie. Het versterkte resultaat is verbonden met het computeranalyse- en verwerkingssysteem via het realtime acquisitiesignaal van het fluorescentiesignaalacquisitiesysteem en de gekwantificeerde realtime resultaatuitvoer wordt verkregen.
Fluorescentie kwantitatieve PCR-machines zijn onderverdeeld in enkelkanaals, tweekanaals en meerkanaals. Wanneer slechts één fluorescerende sonde wordt gebruikt voor etikettering, gebruik dan een enkel kanaal; als er meerdere fluorescerende labels zijn, gebruik dan meerdere kanalen. Een enkel kanaal kan ook multi-fluorescentiemarkers en doelgenexpressieproducten detecteren, omdat er slechts één hoeveelheid doelgenamplificatie tegelijk kan worden gedetecteerd en er meerdere amplificaties nodig zijn om de hoeveelheid verschillende doelgenfragmenten te detecteren. Meerdere kanalen zijn bevorderlijk voor multiplex-PCR en realiseren de functie van het tegelijkertijd detecteren van meerdere doelgenen.
Fluorescentie kwantitatief PCR-instrument wordt voornamelijk gebruikt in klinische medische testen, biomedische onderzoek en ontwikkeling, voedingsindustrie, wetenschappelijke onderzoeksinstellingen, enz. Fluorescentie kwantitatieve detectietechnologie heeft vele aspecten van klinische diagnose, voornamelijk gericht op de klinische diagnose van ziekten veroorzaakt door verschillende pathogenen, zoals hepatitisziekten, geslachtsziekten, ziekten die verband houden met prenatale en postnatale zorg en tuberculose.